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《吉林农业大学》 2018年
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猪子宫内膜炎肺炎克雷伯菌噬菌体的分离鉴定及初步应用研究

张红伟  
【摘要】:猪子宫内膜炎是危害养猪业的重大疾病之一,主要引起母猪繁殖障碍、仔猪腹泻等症状,严重地影响了猪场的经济效益。近年来,随着抗生素的不合理使用,耐药菌株持续增多,耐药征象日益严重,猪子宫内膜炎的防治越发困难。噬菌体是一种能特异性感染并杀死细菌的病毒,它能在细菌体内快速繁殖,并跟随细菌的改变而改变,以噬菌体作为新型抗生素替代剂诊治细菌性疾病已被人们广泛关注。本研究利用药敏试验筛选出具有多重耐药性的猪子宫内膜炎病原菌肺炎克雷伯菌作为噬菌体宿主菌,采用双层平板法从健康猪群粪便和牛群粪便中分离纯化到相应的裂解性噬菌体,分别命名为KP1和KP2,对二者的核酸类型、生理生化性质及其抵抗感染的能力进行初步应用研究。生理生化试验结果表明,两株肺炎克雷伯菌噬菌体KP1和KP2的宿主谱较窄,对宿主菌的特异性很强;它们都以双链DNA分子为遗传物质;对氯仿和乙醚有抗性,说明两株噬菌体没有囊膜。透射电镜观察下可见KP1属于肌尾病毒科噬菌体,它有一个二十面体立体对称的头部,直径约为78±1.5 nm,尾长约为109±2 nm,在温度为40~60℃或pH值为4~12的条件下有较高活性,最佳感染复数为0.1,一步生长曲线显示其感染宿主菌的潜伏期约20 min,裂解期约60min,平均裂解量约为15.4 PFU/cell。噬菌体KP2亦有一个二十面体立体对称的头部,直径74.67±1.43 nm,尾长95.87±1.67 nm,是肌尾病毒科的一员,在40~60℃温度下或pH值3~11的环境中均可有效裂解宿主菌,最佳感染复数为0.01,一步生长曲线显示潜伏期约30 min,裂解期约80 min,平均裂解量约10.75 PFU/cell。噬菌体KP1和KP2分别对耐药猪子宫内膜炎病原菌肺炎克雷伯菌具有很强的体外裂解活性,噬菌体安全性试验检测显示两株噬菌体无毒副作用。二者的混合制剂对宿主菌引起的家兔子宫炎症有一定的防治作用。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S858.28

【参考文献】
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