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《江南大学》 2011年
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拮抗幽门螺杆菌益生菌的挑选及其干涉机制的研讨

陈晓华  
【摘要】:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染能引起胃部疾病如胃炎、胃溃疡乃至是胃癌。H. pylori感染率高,在胃中定植会导致胃炎,可是仅有小部分被感染的人会呈现临床病状,而大部分无报警症状的患者常被忽视。H. pylori引发的疾病现在首要选用三联法即质子泵按捺剂加两种抗生素的办法医治,但此疗法存在副效果激烈、易导致抗药性、愈后复发率高级问题。有研讨标明益生菌能够辅佐医治H. pylori感染引起的疾病,并能减轻不良反响。因而,本文为了研讨使用食疗的办法干涉无症状的H. pylori感染或未感染的人群,防备H. pylori的感染或是下降H. pylori的定植量并减轻炎症,挑选具有拮抗H. pylori效果的益生菌,并测验论述益生菌干涉H. pylori感染的机制,最终研讨挑选到的益生菌在乳品中的使用。 使用乳酸菌的耐酸性、疏水性、自凝聚和交互凝聚效果以及按捺H. pylori成长和尿素酶活性试验,挑选到2株具有潜在拮抗H. pylori效果的乳酸菌,别离为Lactobacillus plantarum 18 (LP18)和L. gasseri Chen (LGChen)。LP18具有耐酸性,能按捺H. pylori成长并下降尿素酶活性。LGChen具有抑菌才能及较强的疏水性、自凝聚和与H. pylori交互凝聚效果。这两株菌除了能够按捺H. pylori SS1成长,还能按捺其他H. pylori菌株的成长。 选用C57BL/6小鼠,树立H. pylori感染的小鼠模型。H. pylori感染的小鼠模型:先用抗生素预处理后,再以H. pylori SS1 (300μL 1×109CFU/mL)结合碳酸氢钠(250μL 0.2mol/L)处理每只C57BL/6小鼠,感染5次,6个月造模完毕的方法,能够得到感染率比较高(80%),定植量安稳(106-107CFU/g)的H. pylori感染的小鼠模型。 使用小鼠模型点评乳酸菌干涉H. pylori感染小鼠的效果。乳酸菌别离为商业菌株L. rhamnosus GG(LGG,作为阳性对照菌)、L. bulgaricus 360(LB)和Streptococcus thermophilus TA460(ST)以及本文挑选出乳酸菌LP18和LGChen,并以药物医治作为阳性对照。动物试验结果标明药物医治后H. pylori的定植量及胃安排的尿素酶活性下降;乳酸菌(LGG、LP18和LGChen)干涉组也能减轻H. pylori引起的炎症,其间LP18干涉组能够明显下降H. pylori的定植量,而LGChen干涉组明显下降血液中的抗H. pylori- IgG抗体水平,因而归纳比较LP18和LGChen干涉效果比LGG好;一般商业菌株LB和ST的效果不明显。一起发现H. pylori感染引起血清、肝脏和胃安排中活性氧自由基(ROS)的升高,谷胱甘肽(GSH)的下降以及丙二醛(MDA)的升高。而乳酸菌干涉以及药物医治后,则能够进步胃和肝脏安排的GSH含量一起下降MDA含量。因而,估测乳酸菌或许具有抗氧化效果而维护机体免受H. pylori感染所引起的氧化损害。 测定了LP18和LGChen的体外抗氧化才能,并用ICR小鼠模型再次点评LP18和LGChen干涉H. pylori感染的效果。结果标明这两株乳酸菌都具有抗氧化的才能,LP18和LGChen的DPPH铲除率别离为43%和62%,羟自由基的铲除率别离为48%和18%,复原力别离相当于62μmol/L和82μmol/L的半胱氨酸的复原力。动物试验标明LGChen和LP18能够下降胃中H. pylori的定植量、尿素酶活性并减轻H. pylori引起的炎症,一起能够进步胃和肝安排中的GSH含量并下降MDA的含量,但没有下降血液中的抗H. pylori-IgG抗体水平。 经过琼脂分散法、共培育法研讨乳酸菌对H. pylori的成长和尿素酶活性的影响,以及用细胞试验研讨乳酸菌对H. pylori粘附人胃上皮细胞以及诱导细胞排泄IL-8的影响,来讨论乳酸菌干涉H. pylori感染的体外机制。结果标明乳酸菌活菌和发酵上清液能够按捺H. pylori成长;上清液的抗菌才能依赖于上清液中的代谢产品(如有机酸和蛋白质类似物)并受pH值影响;共培育时,乳酸菌的活菌和发酵上清液都能按捺H. pylori的成长和尿素酶活性。细胞试验标明乳酸菌发酵上清液、活菌和死菌均能够经过排阻效果按捺H. pylori粘附于SGC7901细胞(按捺率到达50%),可是竞赛和代替效果只能经过上清液和活菌起效果(按捺率达30-40%),死菌无效果或许效果十分小。一起,乳酸菌能够按捺由H. pylori诱导的SGC7901细胞排泄IL-8。 经过抑菌试验和细胞试验以及两种品系的小鼠体内试验,LP18和LGChen干涉H. pylori感染的或许机制:当乳酸菌与H. pylori直触摸摸时,一方面能够使用乳酸菌的代谢物按捺H. pylori的成长和尿素酶活性,然后让H. pylori失掉在酸性环境中赖以生存的条件,另一方面能够经过乳酸菌的空间位阻效果阻止H. pylori的定植,一起经过交互凝聚效果把H. pylori一起沉积排出体外;当乳酸菌与H. pylori没有触摸时,乳酸菌能够经过其抗氧化效果和按捺H. pylori诱导上皮细胞排泄IL-8,维护机体防止因H. pylori感染引起的氧化损害而形成的病变。 研讨LP18和LGChen在乳品中的使用,结果标明LP18和LGChen不能使用乳糖发酵,需增加葡萄糖方可在牛乳中成长,但LGChen在此条件下比LP18成长好;两株菌的发酵乳在4℃条件下可保存21d,不发生明显性改变;LP18或LGChen别离与商业菌株(LB和ST)复合发酵,对发酵乳不发生不良影响,标明LP18或LGChen能够使用在乳品中,开发新产品。
【学位颁发单位】:江南大学
【学位等级】:博士
【学位颁发年份】:2011
【分类号】:R371

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