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《滨州医学院》 2017年
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IL-27对hPMSCs的黏附、增殖、搬迁及免疫调理作用的影响

徐逢皇  
【摘要】:意图:研讨人胎盘源间充质干细胞(human placenta derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)对GVHD模型IL-27水平及Thl、Th2和CD4+IL-1O+T细胞亚群转化的影响;讨论IL-27对hPMSCs黏附、增殖和搬迁以及对其诱导Thl、Th2和CD4+IL-10+T细胞亚群转化的调理机制。办法:(1)选用6-8周龄的非肥壮糖尿病/重症联合免疫缺点小鼠(NOD/SCID)构建人源化GVHD模型,随后用hPMSCs干涉医治。别离于医治后第7、14天将小鼠处死选材。(2)流式微球阵列(Cytometric Bead Array,CBA)检测血清中IFN-γ、IL-4、IL-10 及 ELISA 检测 IL-27 水平。(3)苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法查询肺脏、肾脏的安排形态学改动。(4)流式细胞术(flow cytometry,FCM)剖析脾细胞、肝细胞中 Thl(CD4+IFN-γ+T)、Th2(CD4+IL-4+T)以及CD4+IL-1O+T 细胞份额改动。(5)逆转录 PCR(Reverse-transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、基因测序以及蛋白质免疫印迹(Westen blot)、FCM别离检测IL-27Rα在hPMSCs上的表达。(6)实时细胞剖析(real-time cell analysis,RTCA)仪实时动态检测IL-27对hPMSCs黏附、增殖和搬迁的调理作用。(7)FCM检测IL-27对hPMSCs诱导T细胞向Thl、Th2以及CD4+IL-1O+T细胞转化的调理作用。(8)IL-27 对 hPMSCs 上程序性逝世配体 1(programmed death ligand 1,PDL1)的调理作用及其信号通路经过FCM及Westen blot剖析。成果:1.hPMSCs可改善人源化GVHD小鼠的临床症状(1)成功构建人源化GVHD小鼠模型。(2)比较于GVHD模型组,hPMSCs医治组小鼠体重显着增加(P0.001),临床行为学评分显着下降(P0.001),生存期显着延伸(P0.001)。HE成果显现,与PBS对照组比较,hPMSCs医治组小鼠肺脏、肾脏的病理改动减轻。(3)FCM成果标明,与PBS对照组比较,hPMSCs医治7天后小鼠脾细胞、肝细胞中Th2以及CD4+IL-10+T细胞显着升高(P0.01)而Th1份额显着下降(P0.01),且hPMSCs医治14天后作用愈加显着(P0.01)。(4)细胞因子成果显现,GVHD发作时小鼠血清IL-27、IFN-γ、IL-4、IL-10水平升高(P0.01);与PBS对照组比较,hPMSCs医治7天后IL-4及IL-10水平显着提高(P0.01),而IL-27、IFN-y水平显着下降(P0.01);且hPMSCs医治14天后细胞因子改动愈加显着。但是IL-27与IFN-γ、IL-4、IL-10无相关性。2.IL-27可调理hPMSCs的黏附、增殖、搬迁及促进hPMSCs调理CD4+T细胞转化(1)RT-PCR、Westen blot、FCM以及基因测序成果均标明hPMSCs表达IL-27Rα。(2)30 ng/ml 的 IL-27 显着按捺 hPMSCs 的黏赞同增殖,20 ng/ml 和 30 ng/ml的IL-27均能促进hPMSCs的搬迁。(3)IL-27上调hPMSCs对植物血凝素(PHA)活化的PBMC向Th2细胞亚群转化的促进作用、增强其按捺PBMC向Thl细胞亚群转化的才能;增强hPMSCs对CD4+T细胞排泄IL-10的诱导作用。(4)IL-27可经过JAK/STAT1信号通路上调PDL1在hPMSCs上的表达。定论:1.hPMSCs可经过诱导Thl、Th2细胞转化及CD4+T细胞排泄IL-10,下降IL-27水平,从而减轻GVHD小鼠的临床症状。2.IL-27对hPMSCs的黏附、增殖和搬迁具有显着的调理作用,且IL-27可经过JAK/STAT1通路上调PDL1在hPMSCs上的表达,从而增强hPMSCs对Thl、Th2转化及CD4+T细胞排泄IL-10的调理效应。
【学位颁发单位】:滨州医学院
【学位等级】:硕士
【学位颁发年份】:2017
【分类号】:R392

【参考文献】
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【共引文献】
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【二级参考文献】
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