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《海南大学》 2016年
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一株抗MRSA放线菌的鉴定及其抗菌活性物质的初步分析

于杰  
【摘要】:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Stphylococcus aureus,MR--SA)是引起院内感染的一个重要致病菌,自从MRSA发现以来,其蔓延速度越来越快,且由于抗药性强,已经严重地影响了人类的健康,因此关于MRSA如何防治已经成为全世界共同关注的核心。放线菌是一类重要的微生物,能够产生大量的抗生素,因此在人类的生活中起到了至关重要的作用。本论文从海南省儋州市的土壤中分离筛选对MRSA有拮抗活性的放线菌,以期能够找到新型的有效的抗MRSA物质。实验选择高氏一号合成培养基+70μg/mL重铬酸钾的培养基来分离放线菌,共分离得到240株,通过初步筛选得到4株对MRSA有拮抗效果的放线菌,其中菌株KM1对MRSA的拮抗效果最强,抑菌圈直径在20 mm以上,然后以KM1作为目标菌,进一步进行研究。通过对菌株KM1进行16S rDNA序列测定及系统发育分析发现,KM1与达勒姆链霉菌(Streptomyces durhamensis)相似度最高,达到了 99%,然后结合培养特征、形态学特征、生理生化特征、细胞壁化学组分分析等实验发现,KM1与达勒姆链霉菌大部分特征相同,因此将KM1鉴定为达勒姆链霉菌。用不同的植物病原菌来测试KM1的抗菌谱,结果表明,KM1对多数炭疽病菌有效果,对枯萎病菌基本没有效果。用10种不同的培养基发酵KM1,然后测试发酵液对MRSA的抑菌活性,以此来选择一个最佳的发酵培养基,结果表明,高氏一号液体培养基的发酵液对MRSA的拮抗活性最好,抑菌圈直径为24.8 mm。然后用高氏一号液体培养基对KM1进行发酵,并用乙酸乙酯萃取发酵液,再经过减压浓缩得到活性物质的粗提物,对其稳定性进行分析,结果显示,放线菌KM1的活性物质粗提物在20-120℃之间具有良好的热稳定性,120℃下放置30分钟后依然对MRSA有很好的抑菌活性;紫外照射对活性物质的活性影响较小;pH对活性物质粗提物影响较大,在pH 2.0-3.0以及pH 7.0-12.0条件下没有抑菌活性,pH为4.0-6.0时有抑菌活性,且抑菌圈与空白对照比对没有明显变化,因此活性物质粗提物在pH 4.0-6.0时稳定性较好。
【学位授予单位】:海南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R915

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