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《云南中医学院》 2018年
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五味子醇甲对体外培养人神经干细胞增殖分化的作用研究

宗文天  
【摘要】:神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)是一种能够再生并分化成各种神经细胞的多潜能细胞~([1-2])。脑卒中后神经细胞的死亡或凋亡是肢体及语言障碍的重要发病机制~([3])。研究发现脑内神经干细胞增殖与分化进一步促进神经元再生,可能是脑卒中后期功能恢复的关键~([4])。而五味子醇甲是否具有促进脑卒中后神经干增殖与分化是本课题研究的主要内容。[目的]五味子醇甲是中药五味子的有效成分,也是经典方剂“地黄饮子”代谢后出现在脑脊液中的一种重要生药成分~([5]),而五味子醇甲是否在卒中后功能恢复中起着治疗作用仍有待研究。所以本实验旨在研究五味子醇甲对体外培养人神经干细胞增殖和分化的作用。[方法]设置神经干细胞正常培养组、低浓度用药组、中浓度用药组、高浓度用药组,通过Nestin、Sox2、Pax6三个神经干细胞的特异性标记物对神经干细胞进行鉴定。用ki67标记处于增殖期的细胞,检验细胞增殖状态。苔盼蓝染色传代细胞悬液,鉴定不同组别的细胞死亡率差别,排除操作和组别对实验的影响。得到稳定增殖的神经干细胞后,通过增值曲线的绘制和每代细胞增殖倍数的统计比较各组细胞增殖速度的差异。最后使用流式细胞仪检测细胞周期,研究五味子醇甲对神经干细胞细胞周期的影响。五味子醇甲对神经干细胞分化成神经元影响的研究,使用胶质细胞与神经干细胞共培养的方法,通过倒置显微镜拍照,使用image j观察统计分化得到神经元的轴突的长度,研究五味子醇甲对神经元的成熟度及神经干细胞分化神经元的作用影响。[结果]1.通过免疫荧光染色拍照鉴定,所得到的细胞均为Nestin、Sox2、Pax6阳性细胞并且后期能够分化成神经元,即所得到细胞为人神经干细胞。2.不同组别的细胞ki67均为阳性且通过计数统计发现不同组别之间没有统计学差异(p0.05)。苔盼蓝染色传代细胞悬液发现不同组别细胞之间死亡率没有差异(p0.05)。提示细胞培养体系及技术稳定,排除有关细胞增殖的其他影响因素。3.通过神经干细胞绘制曲线发现1uM用药组的神经干细胞增殖速度显著高于对照组(p0.05),1 uM用药组72小时细胞增殖倍数显著高于对照组(p0.05)。4.通过神经干细胞与胶质细胞共培养分化神经元,发现五味子醇甲1uM用药组的神经元轴突显著长于对照组(p0.05),提示五味子醇甲促进神经干细胞向神经元的分化。[结论]1.五味子醇甲能够促进体外培养的人神经干细胞增殖速度,其机制可能是通过调节细胞周期实现的。其中1uM五味子醇甲对神经干细胞增殖的促进作用最明显(p0.05)。2.在胶质细胞与神经干细胞共培养分化体系下,1uM五味子醇甲能显著促进神经干细胞的分化,促进神经元的轴突生长和神经元成熟(p0.05)。
【学位授予单位】:云南中医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R285

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