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《陕西理工大学》 2019年
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甲基搬运酶METTL21C调控鸡骨骼肌生长发育机制研讨

李蕊清  
【摘要】:甲基搬运酶样21(Methyltransferase like 21,METTL21)是甲基搬运酶超家族的一类远亲成员,包含METTL21A、METTL21B、METTL21C和METTL21D四个成员。其间METTL21C在动物机体各个安排中均表达,尤其是骨骼肌安排中特异性高表达。研讨发现,METTL21C可以促进小鼠C2C12细胞的成肌分解,按捺肌肉萎缩,但其在家禽骨骼肌中的功用研讨相对较少。因而,本论文旨在探求METTL21C影响禽类骨骼肌生长发育机制,为改进家禽肌肉质量、进步出产功用供给参考价值,也为运动科学、肌肉疾病及代谢稳态等医学问题奠定理论基础。本研讨以略阳乌鸡为研讨目标,选用酶消化法别离鸡原代骨骼肌卫星细胞,并以此为细胞模型,探求METTL21C对成肌分解的影响;经过液相色谱质谱检测和免疫共沉淀技能判定METTL21C的互作蛋白,验证METTL21C与Hsc70结合在成肌分解进程中的效果,终究系统阐述METTL21C影响家禽骨骼肌生长发育的分子机理。本研讨首要取得试验成果如下:1.剖析略阳乌鸡腿肌安排转录组测序数据,结合文献查阅,发现甲基搬运酶METTL21C基因或许影响禽类骨骼肌的生长发育;进一步检测METTL21C基因表达规则,成果显现METTL21C在略阳乌鸡各个安排中均表达,其间心肌中表达量最高,其次是骨骼肌;跟着动物日龄添加,METTL21C在骨骼肌安排中的表达呈升高趋势。2.选用酶消化法别离鸡原代骨骼肌卫星细胞,检测肌卫星细胞标志基因Pax7和MyoG的表达水平,终究承认别离取得鸡原代骨骼肌卫星细胞,为后续试验供给细胞模型。3.成功构建METTL21C超表达载体,将其转染至鸡骨骼肌卫星细胞中,成果发现肌肉发育相关基因的表达水平随之升高,标明METTL21C具有促进家禽骨骼肌生长发育的效果。4.根据LC-MS/MS质谱检测技能判定METTL21C的互作蛋白,挑选Hsc70为研讨目标,选用Co-IP技能验证METTL21C和Hsc70存在互作效应。进一步探求METTL21C和Hsc70互刁难肌肉发育的影响,发现独自超表达Hsc70,肌肉发育相关基因表达下降,标明其具有按捺成肌分解的才能,但METTL21C和Hsc70结合削弱了Hsc70按捺成肌分解的效果。5.构建Hsc70基因的K561位点骤变载体,经过Co-IP技能验证骤变后METTL21C与Hsc70之间的互作联系。成果显现K561位点骤变后,METTL21C与Hsc70没有结合,阐明K561为METTL21C与Hsc70的结合位点,由此标明,METTL21C经过与Hsc70的K561位点结合参加调控家禽骨骼肌生长发育进程。
【学位颁发单位】:陕西理工大学
【学位等级】:硕士
【学位颁发年份】:2019
【分类号】:S831.2

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